许多研究使他们对Casp-Cas9的信仰作为一种手段在人胚胎中编辑基因那打艾滋病毒, 和探索表观遗传调控。但是,如果您是真正需要看到CRISPR-CAS9的人,以相信它,史诗般的新研究已经覆盖!所以,抛弃那些疑惑和QUALM,并阅读了CRISPR-CAS9基因组编辑的第一次直接可视化的新闻!
这种令人惊叹的新研究源自实验室mikihiro shibata.(日本金泽大学),Hiroshi Nishimasu., 和Osamu Nureki.(日本东京大学)研究人员使用高速原子力显微镜(HS-AFM)来捕捉CRISPR-CAS9的实时动作电影来描绘基因组编辑的确切动作机制。其他相关的单分子成像方法通常采用荧光探针标签的检测,而不是通过HS-AFM提供的纳米刻度的完整分子的结构和动力学的直接可视化。
灯!相机!行动!这些令人震惊的新电影泄露了CRISPR-CAS9 Genome编辑的过程泄露了什么?
- 出乎意料地,CAS9在没有引导RNA(APO-CAS9)的情况下采用灵活的模块化架构
- 然而,导向RNA(Cas9-RNA)的存在导致形成稳定的双裂效应复合物
- 这允许通过三维扩散而不是一维滑动的DNA靶位点询问
- 靶位的识别导致双链DNA的展开以形成称为R环的结构,其由RNA-DNA杂交和移位的非靶DNA链组成
- CAS9介导的DNA裂解过程的实时可视化证明CAS9 HNH核酸酶在中间体(I)和活性对接(D)状态之间波动在DNA结合时
- 通过将HNH活性位点的对接至靶DNA中的切割位点介导的激烈结构转变(邻近靶链的股骨磷酸盐)导致催化活性停靠构象和靶链的切割
- 同时,Ruvc核酸酶域裂解非目标股
这些令人震惊的纳米级电影的复杂组装,目标搜索和靶分裂肯定足以使最热情的Cas9令人愉快的Cas9信徒!作为研究人员(或者我们应该说董事?)注意“本研究提供了有关CRISPR-CAS9功能动态的前所未有的细节,并突出了HS-AFM阐明了来自不同CRSPR-CAS系统的RNA引导效应核酸酶的动作机制的潜力。”
CRISPR-CAS9在行动!(cc by 4.0)
对于Casp-Cas9基因组编辑,看到相信;有关所有细节,请参阅自然通信,2017年11月。