在过去的几年里，DNA作为苹果翻场了甲基化市场外延蛋白酶编辑工具但是，新开发的CRISPR-CAS13系统在RNA编辑中具有表观遗传投资者购买库存！
6-甲基腺苷（M6A）是最丰富的RNA改性，即使我们知道它涉及染色质可用性，RNA剪接和修复受损的DNA，科学家们仍然努力了解M6A在表观遗传市场中的确切份额。在这次突破性的研究人员在敲击或过度表达整个RNA甲基化景观之前，现在但大卫刘的实验室（哈佛大学，美国波士顿）的成员开发了一种新的针对性的RNA甲基化工具，使他们能够多样化。
介绍DCAS13-M3：靶向M6A甲基
才华横溢的团队使用催化活性的Cas13蛋白（DCAS13），其与单链RNA结合，以发现：
- 当您去除锌指域时，MetT13甲基转移酶是一个很好的效应域，因为它在有效地将放射性标记的甲基转移到RNA底物之间的右平衡，并降低其天然RNA结合亲和力
- 将该突变蛋白加入DCAS13的C末端（称为DCA11M3），并将其添加到大肠杆菌通过引导RNA（GRNA）增加合成RNA构建体的甲基化，通过MERIP-QPCR和免疫荧光测量
- 与非特异性对照相比，DCA11-M3还增加了哺乳动物HEK293T细胞中的合成底物的2-3倍
DCAS13-M3插件
为了最大限度地提高他们的科学股息，脑子表观遗传经纪人重新排列了其系统的组分，并增加了核定位（NLS）或出口信号（NES）和/或MetT114（M14），MetT13的内源结合伴侣，发现：
- 蛋白质在HEK293T细胞中定位于它们的预期细胞室，即使它们靶向靶向通常会在细胞核和细胞质之间捕获蛋白质的转录物
- 核和细胞质构建体在转录物的3'UTR中增加，即使它们在HEK293T细胞中已经内源性甲基化，也增加了转录物的甲基化
- 最具活跃的构建体是DCAS13-M3NLS和DCA13-M3M14NES，并且在GRNA设计成在上游结合30bps时，两个系统都安装最大甲基化，并以8-15bp远离目标腺嘌呤
- 使用免疫荧光测量时，DCAS13-M3NLs对全球M6A的全球水平没有影响，但DCA113M3M14NES将背景甲基化增加1.3倍
- DCAS13-M3M14NES还产生比DCA113-M3NL更多的偏离目标优质赛峰的6倍，尽管在没有特定GRNA的情况下转染时，两者都对转录具有显着影响
没有卖？与基于DCAS9的系统相比已经在市场上，DCAS13-M3NLS在不需要额外的PAM寡核苷酸的情况下工作，并且较少的目标优质塞SEQ峰（2.3％与15.4％相比），并且仍可降低靶mRNA水平或诱导其目标的替代剪接！
购买低，销售高，并利用原始文章中的所有细节自然生物技术亚博pc，6月2020年。